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| 品牌 | Yeasen |
| 貨號(hào) | 40301ES50 |
| 用途 | 細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè) |
| 英文名稱 | Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit |
| 包裝規(guī)格 | 50Tests/盒 |
| 純度 | % |
| 別名 | 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
產(chǎn)品名稱：Yeasen 40301ES50 細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 現(xiàn)貨
產(chǎn)品貨號(hào)：40301ES50
產(chǎn)品品牌：Yeasen
產(chǎn)品規(guī)格：50Tests/盒
產(chǎn)品用途：細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)
英文名稱：Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 |
40301ES50 |
50 T |
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40301ES60 |
100 T |
產(chǎn)品描述
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用了經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即PI staining)方法對(duì)細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡進(jìn)行分析。
碘化丙啶 是一種雙鏈DNA熒光染料,其嵌入雙鏈DNA后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被PI染色后,可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測(cè)定,根據(jù)DNA含量的分布情況,進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。
PI染色后,假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2,正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA pian段化導(dǎo)致部分基因組DNApian斷在染色過(guò)程中丟失,因此凋亡細(xì)胞PI染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,即熒光強(qiáng)度小于1,在流式檢測(cè)的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰,即凋亡細(xì)胞峰。
細(xì)胞凋亡也可以用流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞光散射的變化來(lái)檢測(cè)。 細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。凋亡前期,染色質(zhì)皺縮,細(xì)胞密度增加,前向角光散射色顯著降低。凋亡后期,細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體,前向角光散射和側(cè)向角光散色都顯著降低。
本試劑盒通常應(yīng)用于貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè),則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài),才可以進(jìn)行檢測(cè)。
運(yùn)輸與保存方法
運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。
保存方法:-20℃避光保存,有效期為2年。
【注】如果需要在短時(shí)間內(nèi)多次重復(fù)使用,可以于4℃避光保存,2個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)
1)本試劑盒需要使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。
2)細(xì)胞處理需輕柔,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
3)為防止不同批次細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)時(shí)所處周期不同導(dǎo)致重復(fù)性差,可以在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行細(xì)胞的同步化處理。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)
生長(zhǎng)期,貼壁細(xì)胞一般在50~80%匯合度時(shí)收集為宜。
4)400目篩網(wǎng)過(guò)濾是用來(lái)將粘在一起的細(xì)胞團(tuán)濾掉,留下單細(xì)胞,否則會(huì)出現(xiàn)人為的多倍體干擾。如果沒(méi)有條件過(guò)濾,請(qǐng)?jiān)谌旧皩⒓?xì)胞輕彈以分散,再進(jìn)行染色。
5)熒光染料均存在淬滅問(wèn)題,保存和使用過(guò)程中請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
6)操作碘化丙啶時(shí),應(yīng)注意防護(hù),、避免吸入。
7)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
1)細(xì)胞樣品制備:細(xì)胞數(shù)量控制在1×105~1 × 106個(gè)。
a)貼壁細(xì)胞:小心吸除細(xì)胞培養(yǎng)液,用胰酶消化細(xì)胞,制備成單細(xì)胞懸液。1000 g離心5 min,沉淀細(xì)胞,棄上清,用1 mL預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞一次,離心收集細(xì)胞。
b)懸浮細(xì)胞:1000 g離心5 min,沉淀細(xì)胞,小心吸除上清。加入1 mL預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心收集細(xì)胞。
c)組織細(xì)胞:將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后,用0.25%的胰酶消化0.5-1 h,經(jīng)過(guò)200-400目篩網(wǎng)過(guò)濾得到單細(xì)胞懸液。1000 g離心5 min,沉淀細(xì)胞。加入約1 mL預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。
2)細(xì)胞固定:細(xì)胞沉淀用1 mL預(yù)冷的70%乙醇輕輕混勻,4℃固定2 h以上或者過(guò)夜。接下來(lái)1000 g,離心5 min沉淀細(xì)胞后,用1 mL預(yù)冷的PBS重懸。然后再次1000 g離心5 min沉淀細(xì)胞。
3)染色:在0.5 mL染色緩沖液(40301-C)中加入10 μL 碘化丙啶儲(chǔ)液(40301-B)和10 μLRNase A(40301-A)溶液,混勻待用。每個(gè)細(xì)胞樣品加入0.5 mL配置好的碘化丙啶染色 液,輕輕混勻重懸細(xì)胞。37℃避光孵育30min,就可以進(jìn)行流式檢測(cè),流式檢測(cè)*在5h內(nèi)完成。
【注】:配置好的PI染色液在短時(shí)間內(nèi)可以4℃保存,宜當(dāng)日使用。
4)流式檢測(cè)和分析:細(xì)胞用400目篩網(wǎng)過(guò)濾,用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),在激發(fā)波長(zhǎng)488 nm波長(zhǎng)處檢測(cè),同時(shí)檢測(cè)光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析
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