一步法支原體檢測試劑盒 50T 現(xiàn)貨
- 發(fā)布日期： 2021-06-15
- 更新日期： 2024-08-06
產(chǎn)品詳請
| 產(chǎn)地 |
美國
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| 品牌 |
CLARK Bioscience
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| 貨號(hào) |
T102
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| 用途 |
支原體檢測
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| 包裝規(guī)格 |
50次/份
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| 純度 |
＞95%%
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| 是否進(jìn)口 |
是
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產(chǎn)品品名：一步法支原體檢測試劑盒 50T 現(xiàn)貨
產(chǎn)品型號(hào)：T102
產(chǎn)品規(guī)格： 50次/份
產(chǎn)品商標(biāo)：美國CLARK Bioscience
產(chǎn)品簡介：
一步式 Quickcolor 支原體檢測試劑盒旨在檢測細(xì)胞培養(yǎng)基或其他液體樣品中的支原體。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)人員頭疼的問題。支原體是一種小而簡單的細(xì)菌，沒有細(xì)胞壁，是最普遍和最嚴(yán)重的細(xì)胞系污染源之一。即使在密度高達(dá) 107-9 個(gè)細(xì)胞/mL 的情況下，支原體污染也是不可見的，濁度或 pH 值沒有明顯變化。
事實(shí)上，細(xì)胞培養(yǎng)研究中最常見的支原體感染源是另一種先前被感染的培養(yǎng)物帶入實(shí)驗(yàn)室。另一個(gè)主要來源是實(shí)驗(yàn)室工作人員，因?yàn)槿祟愔гw仍然是細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染的主要來源。
支原體是一個(gè)問題，因?yàn)樗鼈儠?huì)導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物發(fā)生變化，包括生長速率改變、形態(tài)變化、染色體畸變和細(xì)胞代謝改變。事實(shí)上，一個(gè)被支原體污染的細(xì)胞系由于其特性的改變而被視為不同的細(xì)胞系。
建議所有進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室定期檢測支原體污染。有多種支原體檢測可用，每種檢測都有自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。建議將三種方法（培養(yǎng)試驗(yàn)、DNA 染色和 PCR）結(jié)合用于常規(guī)檢測，確保在體外不生長的支原體菌株可以通過 DNA 染色和 PCR 檢測。
培養(yǎng)測試最敏感，幾乎可以檢測所有物種。然而，細(xì)胞培養(yǎng)基中存在的主要支原體之一，豬鼻支原體，無法通過培養(yǎng)方法檢測到。此外，獲得結(jié)果需要一個(gè)月的時(shí)間，所需的培養(yǎng)基復(fù)雜，保質(zhì)期相對較短，必須包括活的陽性對照。
Hoechst 染色是一種通用的 DNA 染色，對支原體沒有特異性。但對結(jié)果的解釋可能存在問題。
PCR 提供了一種檢測支原體的快速、相對高通過的方法。它既相對具有成本效益，又需要最少的培訓(xùn)。
使用無支原體污染的經(jīng)過驗(yàn)證的細(xì)胞系是在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域生成穩(wěn)健、可靠和可重復(fù)數(shù)據(jù)的先決條件。截至 2013 年年中，提交給 Nature 期刊的手稿必須附有可重復(fù)性檢查表，其中一項(xiàng)要求研究人員提供支原體污染檢測證明。
一步法Quickcolor支原體檢測試劑盒簡單快捷，一小時(shí)內(nèi)出結(jié)果。基于特殊的等溫RCA（滾環(huán)放大），反應(yīng)甚至可以在水浴中進(jìn)行。陽性反應(yīng)可以很容易地通過顏色從粉紅色變?yōu)樗{(lán)綠色來指示，這可以用肉眼判斷。
該試劑盒可以檢測多種支原體（例如 M. Hyorhinis，M. Fermentans，M. Arginini，M. Hominis，M. Orale，M. Salivarium，M. Pirum，Aholeplasma Laidlawii，M. Agalactiae，M. Bovis， M. Buccale，M. Arthritidis，M. Pulmonis ) 具有極高的靈敏度和特異性。上述七種支原體占細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的 98% 以上。
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性：
產(chǎn)品在 4 ℃ 下運(yùn)輸。收到后將所有組件儲(chǔ)存在-20 ℃。在這些條件下，產(chǎn)品至少可以穩(wěn)定兩年。
套件組件：
1.Solution 1: 1150 μL (50 Test)
2.Solution 2: 50 μL (50 Test)
3.煮沸支原體DNA：50 μL
4.礦物油：1500 μL
使用程序：
1.樣品制備：
細(xì)胞系在檢測前應(yīng)預(yù)培養(yǎng)至少 3 天。樣品應(yīng)來自融合度為 70-90% 的培養(yǎng)物。細(xì)胞培養(yǎng)上清液可以直接檢測。
2.反應(yīng)系統(tǒng)設(shè)置：
(1)總反應(yīng)體積為25 μL。建議進(jìn)行陽性和陰性對照反應(yīng)。在室溫或 37 ℃下解凍溶液 1 并充分混合。溶液 2 應(yīng)始終保存在 -20 ℃。根據(jù)表 1 設(shè)置反應(yīng)系統(tǒng)。
(2) 移液數(shù)次混合，每 0.2 mL PCR 管中加入 24 μL。
(3)在陽性對照管中加入1 μL支原體DNA，在試管中加入1 μL細(xì)胞培養(yǎng)上清液。
反應(yīng)：選擇以下反應(yīng)方法之一：
(1)在水浴上反應(yīng)。向每個(gè)管中加入 25 μL 礦物油以防止水分蒸發(fā)，并將管置于 61°C 的水浴中 60 分鐘。
(2)在熱循環(huán)儀PCR儀上反應(yīng)。由于一般水浴溫差較大，如果有PCR儀，請?jiān)赑CR儀上進(jìn)行反應(yīng)。如果 PCR 儀的蓋子可以設(shè)置為 100°C，則不需要在每個(gè)管中添加礦物油。PCR 儀設(shè)置如下：61 ℃，60 min；10 ℃，∞；蓋子，100 ℃。
3.結(jié)果分析：反應(yīng)后，如果反應(yīng)管的溶液顏色為紫紅色，則說明試樣中沒有支原體存在。如果反應(yīng)管的溶液顏色為藍(lán)綠色，則表明測試樣品被支原體污染
實(shí)驗(yàn)筆記：
. 如果反應(yīng)在水浴中進(jìn)行，請使用水銀溫度計(jì)確保溫度準(zhǔn)確。
. 61°C 下的反應(yīng)時(shí)間不應(yīng)超過 65 分鐘。
. 反應(yīng)結(jié)束后，請勿打開反應(yīng)管。
