CellBiolabs  CBA-401 pCMV-GFP-LC3表達(dá)載體

背景

自噬是一種溶酶體降解細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)的途徑，在應(yīng)激條件下如氨基酸饑餓或病毒感染時(shí)被激活。哺乳動(dòng)物細(xì)胞在短時(shí)間的饑餓狀態(tài)下通過(guò)自噬來(lái)降解非必需的細(xì)胞成分，從而釋放出營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)用于生物合成反應(yīng)。最近的研究結(jié)果表明，自噬也有助于發(fā)育、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和癌癥，以及長(zhǎng)壽。在氨基酸饑餓等應(yīng)激信號(hào)的誘導(dǎo)下，自噬的*步是自噬體的形成。一種發(fā)表良好的自噬體標(biāo)記蛋白。MAP LC3最初被鑒定為微管相關(guān)蛋白，命名為微管相關(guān)-蛋白輕鏈-3’。LC3是一種小的16- 18kda蛋白，可溶于非饑餓細(xì)胞，但在氨基酸饑餓時(shí)成為外周膜相關(guān)蛋白。通過(guò)免疫電子顯微鏡，LC3已被證明與自噬體的內(nèi)外膜結(jié)合，而膜結(jié)合是通過(guò)與脂質(zhì)磷脂酰乙醇胺的共價(jià)結(jié)合介導(dǎo)的。在Western blot中，LC3有兩種形式，LC31和LC311。LC31在可溶性部分，ano LC3Il在顆粒狀膜部分。非饑餓細(xì)胞中均可見(jiàn)LC3I和LC3II，但自噬誘導(dǎo)過(guò)程中LC3Il的比例增加。gfp標(biāo)記的LC3表達(dá)可能有助于自噬實(shí)驗(yàn)。pcv -GFP-LC3是一種簡(jiǎn)單的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體，其中人LC-3B基因與GFP基因在表達(dá)載體框架內(nèi)融合(圖1)。兩種載體均含有卡那霉素和新霉素抗性基因作為選擇標(biāo)記。

圖1所示。注意:細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)在含30 ug/mL卡那霉素的培養(yǎng)基中進(jìn)行。

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