MEF 飼養(yǎng)層細(xì)胞

• 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞可以在沒有LIF的情況下進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)

• 在 1 mL 中呈現(xiàn)為 5×10^6個(gè)細(xì)胞

• 在添加ES細(xì)胞之前必須線粒體滅活

Backoround胚胎干細(xì)胞(ES)來源于許多物種胚泡的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM)。它們能夠在飼養(yǎng)細(xì)胞層上無限制的、未分化的增殖，并保持核典型的正常和表型穩(wěn)定。此外，胚胎干細(xì)胞有能力在體外和體內(nèi)分化成多種類型的細(xì)胞。在mES細(xì)胞培養(yǎng)中，可以在生長培養(yǎng)基中添加LIF代替飼喂紫菜。然而，LIF對hES細(xì)胞培養(yǎng)的影響不如mES。因此，hES細(xì)胞的產(chǎn)生和維持都需要使用供體細(xì)胞。

應(yīng)用程序

胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)喂養(yǎng)細(xì)胞用于維持小鼠或人類胚胎干細(xì)胞未分化狀態(tài)。在加入胚胎干細(xì)胞之前，細(xì)胞必須有絲分裂滅活，如用絲裂霉素C處理(2-4小時(shí)，10 ug/mL)。

質(zhì)量控制

根據(jù)形態(tài)學(xué)，這個(gè)冷凍瓶包含至少5.0 x 106 MEF喂養(yǎng)細(xì)胞。臺盼藍(lán)染料排除，活細(xì)胞計(jì)數(shù)。MEF飼養(yǎng)細(xì)胞檢測無微生物污染。

媒介

1. 培養(yǎng)基:D-MEM(高糖)，10%胎牛血清(FBS)， 0.1 mM MEM非必需氨基酸(NEAA)， 2 mM l -谷氨酰胺，1% Pen-Strep(可選)

2. 冷凍培養(yǎng)基:90%胎牛血清，10% DMSO

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