| 產地 | 美國 |
| 品牌 | 安捷倫 |
| 貨號 | 5191-4079 |
| 用途 | 酶切片段化 |
| 包裝規(guī)格 | 16 reactions |
| 純度 | % |
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安捷倫 SureSelect酶切片段化試劑盒
產品名稱：SureSelect enzymatic fragmentation kit, 16 reactions
產品貨號：5191-4079
適用于DNA起始量在10ng-200ng之間的各種GC含量、不同樣本類型（血液、新鮮冷凍組織和FFPE），推薦在37攝氏度酶解15分鐘。
酶裂解的熱循環(huán)程序
步驟 | 溫度 | 時間 |
1 | 37℃ | 見下表 |
2 | 65℃ | 5min |
3 | 4℃ | Hold |
碎片持續(xù)時間基于樣本類型和NGS讀取長度
NGS read 長度 | 目標片段的大小 | 持續(xù)時間為37℃ | |
高質量的DNA樣本 | FFPE DNA樣本 | ||
2X100 | 150-200bp | 15min | 15min |
2X150 | 180-250bp | 10 min | 15min |
1.準備基因組DNA樣本并分析其質量
文庫制備方案要求輸入10 ng到200 ng的gDNA，初始DNA樣品體積為7 ul，用于酶促DNA損傷對于某些FFPE樣品，DNA輸入量或定量方法可能需要調整。如下詳細。為了獲得*的測序結果，在推薦范圍內使用*數量的DNA輸入
2.從新鮮生物樣品中制備高質量的Gdna
采用合適的純化系統，如Qiagen's QIAamp DNA迷你試劑盒，按照制造商的協議進行純化準備請注意確?；蚪MDNA樣本質量高，OD為260/280范圍從1.8到2.0.使用Oubit BR dsDNA檢測試劑盒測定每個gDNA樣品的濃度。按照制造商對儀器和檢測試劑盒的說明操作從新鮮生物樣本中提取的DNA不需要額外的DNA樣本鑒定。
3.從FFPE樣品中制備和鑒定gDNA
使用Qiagen's QIAamp DNA FFPE組織試劑盒和Qiagen’s QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，按照制造商的協議從FFPE組織切片中制備gDNA。分兩輪洗脫MinElute柱上的fina gDNA樣品，每輪使用30 ul緩沖液ATE。最終洗脫體積約為60 ul。
請注意如果組織在蛋白酶K消化一小時后出現不完全裂解。加入另外10 ul的蛋白酶K，在56℃繼續(xù)孵育。周期性的混合，持續(xù)3個小時。
將gDNA樣本保存在冰中，以便當天文庫準備，或在-20℃保存以備日后處理。
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