6xHis 標(biāo)簽，也稱為多組氨酸標(biāo)簽， His6標(biāo)簽或hexa組氨酸標(biāo)簽, 是一種在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中目標(biāo)蛋白的C端或N端上由至少6個(gè)組氨酸殘基鏈接上所組
成的氨基酸序列。這種標(biāo)簽通常在重組蛋白的純化中使用，這是因?yàn)榻M氨酸殘基的序列可以在特定的緩沖液條件下結(jié)合到幾種類型固定的離子上
（比如鎳，鈷和銅）從而達(dá)到容易檢測(cè)和純化His標(biāo)簽蛋白的目的。
由于它的相對(duì)小的分子量，低的免疫原性，親水性和在去污劑和其他添加劑存在的情況下的易變性, 因此在天然和變性的條件下，多組氨酸標(biāo)簽是
被公認(rèn)為最廣泛使用的親和標(biāo)簽用于一系列的蛋白純化目的。
除此之外，它可以檢測(cè)和純化重組蛋白而無(wú)需使用蛋白特異性的抗體或探針，同時(shí)抗His標(biāo)簽抗體的存在用于His標(biāo)簽蛋白的檢測(cè)中使 6xHis 標(biāo)簽更
加的普遍和受歡迎。
親和純化蛋白：
在大腸桿菌和其他原核系統(tǒng)中表達(dá)的多組氨酸標(biāo)簽重組蛋白通常使用固定的金屬離子親和色譜來(lái)純化或稱為IMAC. 在這個(gè)過(guò)程中，支撐物 (通常是
珠狀瓊脂糖凝膠或磁珠顆粒)用合適的耦合試劑來(lái)進(jìn)行衍生，比如氨三乙酸nitrilotriacetic acid (NTA) 或亞氨乙酸iminodiacetic acid (IDA).
這些螯合的基團(tuán)會(huì)固定所需要的二價(jià)金屬離子 (比如鎳，銅，鈷和鋅)，從而這些金屬離子最后負(fù)責(zé)結(jié)合和分離混合液蛋白中的目標(biāo)分子。在選擇使
用哪個(gè)配基上，你需要考慮IMAC樹(shù)脂的結(jié)合能力主要取決于被純化蛋白的性質(zhì)和在純化過(guò)程中所使用的金屬離子。
鎳，鈷，銅是進(jìn)行純化His標(biāo)簽蛋白首選的被廣泛使用的離子，由于他們?cè)谒芤褐袑?duì)于組氨酸和半胱氨酸良好的親和性。在這三個(gè)離子中，鎳是
最廣泛使用的金屬離子，它呈現(xiàn)出最高的親和性和選擇性對(duì)于His標(biāo)簽蛋白. 然而，它也會(huì)非特異性的結(jié)合包含組氨酸群的內(nèi)源蛋白。
從另一個(gè)側(cè)面講，鈷提供最特異性的結(jié)合和組氨酸標(biāo)簽因此當(dāng)純度是首要選擇時(shí)鈷是二價(jià)陽(yáng)離子的首選。
銅離子和鎳鈷離子相比和His標(biāo)簽蛋白的結(jié)合非常強(qiáng)勁，但是它的特異性在三種離子中是最弱的。由于這個(gè)原因，當(dāng)純度不是最主要的目的時(shí)銅離
子IMAC被使用。
IMAC 方法：
在制備樣品時(shí)，細(xì)胞被捕獲和裂解通過(guò)酶法或機(jī)械條件。因?yàn)槎嘟M氨酸標(biāo)簽在生理PH值和離子強(qiáng)度下很好的結(jié)合到IMAC樹(shù)脂上。結(jié)合在幾乎中性
緩沖液的條件下完成。大部分科研人員使用包含10-25 mM咪唑的TBS溶液作為結(jié)合/漂洗緩沖液來(lái)防止帶有組氨酸殘基內(nèi)源蛋白的非特異性的結(jié)合.
被捕獲的組氨酸標(biāo)簽蛋白的洗脫和回復(fù)通常使用增加的咪唑濃度(至少 200 mM)來(lái)實(shí)現(xiàn)，低PH值或一個(gè)過(guò)量的強(qiáng)螯合劑比如EDTA.
你可以從各種起始緩沖液中來(lái)純化樣品，因?yàn)楦邼舛鹊柠}和某些變性劑是兼容的。然后，請(qǐng)記住還原劑，氧化劑和螯合劑比如EDTA通常和IMAC親
和樹(shù)脂是不兼容的。
其他用于His標(biāo)簽蛋白的應(yīng)用：
除了純化多組氨酸標(biāo)簽重組蛋白之外，6xHis標(biāo)簽也可以用于如下應(yīng)用。
ELISA 或免疫印跡檢測(cè)：
你可以使用鎳螯合的辣根過(guò)氧化物酶來(lái)進(jìn)行基于HRP組氨酸標(biāo)簽蛋白的檢測(cè)而無(wú)需使用抗體。同時(shí)，抗6xHis的抗體是高度靈敏和特異性的對(duì)于那些
含有組氨酸標(biāo)簽的蛋白.
蛋白相互作用pull-down：
鎳瓊脂糖樹(shù)脂可以用于純化，鑒定和檢測(cè)組氨酸標(biāo)簽蛋白的相互作用。
微孔板包被. 鎳或銅包被的微孔板可以從初始樣本或半純化的樣品中使融合蛋白進(jìn)行包被，從而進(jìn)行基于各種微孔板和報(bào)告基因的檢測(cè).
凝膠染色. 幾種免疫分析方法利用多組氨酸標(biāo)簽通過(guò)抗多組氨酸標(biāo)簽抗體或通過(guò)SDS-PAGE來(lái)檢測(cè)靶蛋白.
熒光標(biāo)簽. 熒光6組氨酸標(biāo)簽也被科研人員開(kāi)發(fā)用于蛋白遷移和轉(zhuǎn)移。
