糖類(lèi)親和色譜是一種純化糖蛋白，凝集素和其他糖代謝蛋白的方法. 這種親和色譜使用糖類(lèi)配基比如糖類(lèi),糖蛋白類(lèi)和糖類(lèi)基質(zhì)用于純化。基質(zhì)
需要被活化用于配基的共價(jià)固定。用于偶聯(lián)配基的各種方法取決于活化的試劑如下:
The divinyl sufone (DVS) 偶聯(lián):
Diviny sulfone (DVS) 是一種雙官能的化合物用于激活包含羥基基團(tuán)的基質(zhì). DVS活化的基質(zhì)能夠共價(jià)結(jié)合糖和碳水化合物通過(guò)存在于碳水化合
物上的羥基。使用DVS來(lái)進(jìn)行基質(zhì)的活化是快速的，通常室溫70 min. 這種方法不僅引入一個(gè)高度反應(yīng)性的乙烯基同時(shí)也有一個(gè)間隔臂來(lái)避免結(jié)合
鍵的位阻. 這種二乙烯砜活化的基質(zhì)是穩(wěn)定的懸浮液在4°C 下可以保存一年。 DVS偶聯(lián)配基的連接化學(xué)性能在堿性條件下是不穩(wěn)定的，因此凝集素
的酸性洗脫是推薦使用當(dāng)PH洗脫方法需要的時(shí)候。
環(huán)氧化物偶聯(lián):
環(huán)氧化物配基偶聯(lián)的方法使用雙官能化合物叫做環(huán)氧乙烷. 環(huán)氧乙烷比如 1,4-butanediol diglycidyl ether 被固定到瓊脂糖基質(zhì)上來(lái)形成環(huán)氧化
物活化的瓊脂。這種環(huán)氧化物活化的瓊脂在水溶液中是不穩(wěn)定的因此應(yīng)該立即被用于配基的偶聯(lián)。環(huán)氧化物瓊脂和配基形成共價(jià)鍵，這種配基包含
親核物質(zhì)比如氨基，巰基 ，羥基和酚功能基團(tuán)。碳水化合物有自由的羥基能夠和環(huán)氧化物反應(yīng)形成醚鍵。這個(gè)偶聯(lián)的化學(xué)反應(yīng)能夠額外提供一個(gè)12
原子的親水的位阻空間。因?yàn)檫@種偶聯(lián)條件對(duì)于碳水化合物來(lái)說(shuō)要求高的PH值和高的溫度, 這種方法不推薦用于二氧化硅和玻璃微珠基質(zhì)。
N-羥基琥珀酰亞胺偶聯(lián)：
在N-羥基琥珀酰亞胺方法中, N-羥基琥珀酰亞胺作為偶聯(lián)劑使用，這個(gè)偶聯(lián)劑能夠和包含胺基的配基形成穩(wěn)定的化學(xué)鍵. 這種穩(wěn)定的胺化學(xué)鍵在配基
和偶聯(lián)劑之間形成.這種方法用于偶聯(lián)包含針對(duì)基質(zhì)的胺基基團(tuán)的糖蛋白或碳水化合物衍生物. 這種偶聯(lián)方法并且提供一個(gè)8個(gè)碳的空間位阻。
溴化氰偶聯(lián):
這種偶聯(lián)方法用于固定包含氨基基團(tuán)的配基。這種方法不適用于偶聯(lián)小分子因?yàn)樗荒芴峁┤魏慰臻g位阻。這種偶聯(lián)方法適用于固定糖蛋白.
丙基硫氧嘧啶偶聯(lián):
丙基硫氧嘧啶活化的基質(zhì)包含活化的 2-thiopyridyl disulphide基團(tuán)能夠和包含巰基的配基發(fā)生可逆反應(yīng)來(lái)形成混合的二硫化物. 它用于固定糖蛋
白通過(guò)存在于糖蛋白上的自由巰基基團(tuán). 可以用于固定碘乙酰胺碳水化合物衍生物通過(guò)巰基的烷化. 丙基硫氧嘧啶偶聯(lián)的方法也提供一個(gè)空間位阻。
吖內(nèi)酯偶聯(lián):
吖內(nèi)酯活化的基質(zhì)是通過(guò)丙烯酰胺和吖內(nèi)酯的共聚作用形成. 這種方法適用于包含氨基基團(tuán)的配基反應(yīng)從而適用于糖蛋白的結(jié)合.
