應(yīng)用Western Blotting的方法檢測(cè)血清中某種蛋白的含量是,最關(guān)鍵的問(wèn)題是要將血清做怎樣的電泳前處理.
一般的處理方式:
1. 常規(guī)分離血清,即取血后常溫放置,使其凝固,然后3000 rpm 15 min離心,取上清即可。
2. 測(cè)血清蛋白濃度。
3. 用Laemmli buffer（蛋白裂解液）稀釋至所需濃度，我一般為5ug/ul.
4. 加入適量loading buffer，100℃煮5分鐘。注意：有時(shí)會(huì)出現(xiàn)水煮后，蛋白液變得非常粘稠，這時(shí)可以在65℃煮10-20 minutes以替代沸水煮。
PS：對(duì)于目標(biāo)蛋白在血清中含量很低，或者目標(biāo)蛋白分子量與白蛋白或球蛋白分子量相近的情況下，必?zé)┮コ逯械陌椎鞍缀?/span>/或球蛋白，以下是知名廠商G-Biosciences提供的試劑盒，使用較為簡(jiǎn)便，同時(shí)價(jià)格也不貴哦。
美國(guó)G-Biosciences-AlbuminOUT?白蛋白去除試劑盒
血漿和腦脊髓液等樣本中，包含大量的白蛋白，從而封閉掉在二維凝膠電泳中發(fā)現(xiàn)和鑒定其他低豐度蛋白的可能。AlbuminOUT?白蛋白去除試劑盒被設(shè)計(jì)用來(lái)在這種樣本中大量去除白蛋白。
這種白蛋白去除方法是基于白蛋白和Cibachron藍(lán)色染料的結(jié)合。AlbuminOUT?被優(yōu)化從樣本中去除人的白蛋白。AlbuminOUT?使用快速離心柱方法，每個(gè)柱子含有0.2ml的染料結(jié)合樹(shù)脂，從而可以結(jié)合大于2mg的人白蛋白。AlbuminOUT?可以從5-50微升人血漿中去除大于98%的白蛋白。
離心柱形式可以在10分鐘內(nèi)去除白蛋白。高結(jié)合力的藍(lán)色染料結(jié)合樹(shù)脂可以從人，豬，羊，狗，兔，大鼠和牛樣本中達(dá)到瞬間的結(jié)合和去除白蛋白。AlbuminOUT?或許也可以從其他物種中去除白蛋白。適用于處理25或50個(gè)樣本。
Figure 1: 2D analysis of whole human serum before (left) and after
(right) treatment with AlbminOUT?.
產(chǎn)品特點(diǎn)：
l 從樣本中不到10分鐘的時(shí)間內(nèi)去除白蛋白
l 基于白蛋白和Cibachron藍(lán)色染料的結(jié)合
l 每個(gè)柱子的結(jié)合力大于2mg的人白蛋白
l 從5-50微升人血漿中去除大于98%的白蛋白
應(yīng)用：
從生物學(xué)樣本比如血漿和腦脊髓液中去除白蛋白
產(chǎn)品信息：
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產(chǎn)品貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
包裝 |
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786-251 |
AlbuminOUT?白蛋白去除試劑盒 |
25 Preps |
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786-251T |
AlbuminOUT?白蛋白去除試劑盒 |
4 Preps |
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786-252 |
AlbuminOUT?白蛋白去除試劑盒 |
50 Preps |
